能够不受目的片段GC含量及长度的影响,进行正确的定量

Illumina公司二代测序用文库定量试剂盒 GenNext™ NGS Library Quantification Kit

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价格表

GenNextTM NGS Library Quantification Kit

Code No. 包装 价格 保存温度 说明书
NLQ-101 500次份 RMB 5,450 -20℃ -
NLQ-101S 100次份 RMB 1,100 -20℃ -

用途

Illumina公司二代测序用文库定量

说明

GenNextTM NGS Library Quantification Kit是illumina® 二代测序用的文库定量试剂盒。

Illumina公司NGS测序仪上加载的文库量对数据的数量及质量有很大影响。文库量过少,簇密度就较低,得到的测序数据量就比较少。相反,文库量过多,簇清晰度就变差,数据质量就会下降。因此,文库的正确定量就变得非常重要。

文库定量的方法有分光光度检测法及荧光测定法,这些测定法中,因为测定的是全部的DNA,所以不能正确地测定对测序有效的包含P5P7接头的DNA的浓度。
GenNextTM NGS Library Quantification Kit中,设计了能与Illumina公司采用的P5P7序列配对的引物,来进行qPCR法分析,能准确地定量能够结合在Flow cell的文库。另外,因为使用了KOD SYBR® qPCR Mix,针对长链及GC富集的目的片段,也可以稳定进行文库定量。


 

我们提供了文库浓度计算工具,方便进行定量后的分析。请点击此处进入在线工具下载计算软件本地操作


 

特征

●低偏差的正确定量

使用了KOD SYBR® qPCR Mix,不易受文库GC含量及长度影响,无论何种文库都可以正确地定量。使用本试剂盒定量得到的值,可以得到稳定的簇密度。


●可以较广的范围内进行定量

备有从20pM至0.0002pM的6个浓度的Standard DNA,能够在较广的范围内正确地定量。


●简便

本试剂盒含有文库定量必需的全部试剂(qPCR试剂、Primer Mix、Standard DNA及文库稀释用buffer),可以简单地进行文库定量。  

实验例

1. 不同目的片段长度时PCR效率的比较

用各公司的文库定量试剂盒对附加有接头序列的150~800bp的模板DNA进行分析,比较了PCR效率。结果显示,其他公司的文库定量试剂盒随着目的片段长度的变长,可以看到PCR效率降低,本试剂盒没有因目的片段长度变化而出现PCR效率下降。


2.  各种GC含量的目的片段的PCR效率比较

用各个公司的文库定量试剂盒对附加有接头序列的各种GC含量的模板DNA进行分析 ,比较PCR效率。结果显示:其他公司的文库定量试剂盒在定量GC含量高的目的片段时,如融解曲线分析图所示,不能确认目的片段的扩增,PCR效率也不能测定。另一方面,使用本试剂盒可特异地扩增全部的目的片段,而且各目的片段的PCR效率误差也最小。

通常,含有CpG的启动子区域或嗜热菌等细菌中GC含量比较高。在对其进行文库定量时,使用不易受GC影响的本产品就可以正确地进行定量。



3. 使用易于形成二级结构的短链目的片段进行探讨

将附加有接头序列的miRNA(human let-7a)序列(144bp)Standard DNA为模板进行分析得到的扩增曲线进行比较。将miRNA目的片段稀释至20pM之后,按10倍的梯度进行稀释,与试剂盒中添加的Standard DNA同时进行分析。

结果显示,miRNA目的片段与Standard DNA的扩增曲线与各稀释水平基本一致,PCR效率分别是97.8%miRNA)和97.1%Standard DNA),也基本相等。通过本次探讨可以确认:像miRNA这样的易于形成二级结构的短链目的片段,使用本试剂盒,也能够准确地进行定量。





 
产品内容

KOD SYBR® qPCR Mix*
 KOD SYBR® qPCR Mix
 50x ROX reference dye

Standard & Primer Set
 Standard DNA 1~6**
 5× Primer Mix
 50× Dilution Buffer

*
含有1个套装的KOD SYBR® qPCR Mix (Code: QKD-201)
**含有20 pM, 2 pM, 0.2 pM, 0.02 pM, 0.002 pM, 0.0002 pM 浓度的Standard DNA 。
20 μl 反应体系500次份。

注意事项

SYBR®Thermo Fisher Scientific k.k.注册的商标。

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KOD SYBR® qPCR Mix QKD-201 1.67ml× 3支 RMB 2,450 -20℃ 产品说明书