使用磁硅珠的高效率Total RNA抽提试剂盒。

高效率Total RNA抽提试剂盒 MagExtractor™ -RNA-

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价格表

Code No. 包装 价格 保存温度 说明书
NPK-201F 100次份 RMB2,600 4℃ -

用途

●从培养细胞组织酵母等中抽提Total RNA

说明

本试剂盒是用来从培养细胞和组织等生物样品中抽提高纯度Total RNA。回收的Total RNA主要用于RT-PCR等反应。
本试剂盒是利用磁性硅珠能吸附裂解溶液中的Total RNA的原理来回收Total RNA,无需使用原来的AGPC法中必需的苯酚等有害试剂去除蛋白质的操作和乙醇沉淀操作及高速离心分离操作。
本试剂盒可使用磁珠分离专用台架。

 

特征

●适用于各种样品

能够从培养细胞组织、酵母等中高效率地抽提Total RNATotal RNA中主要包含rRNA和mRNA

 

原理

简便短时间

其基本原理是利用磁硅珠对Total RNA的吸附性,能简便地在短时间内抽提Total RNA
 

可进行高纯度Total RNA的抽提

实验例

1.得率与纯度的探讨

以人细胞株HL60的2×106细胞为样品,分别使用本试剂盒与用一般的RNA抽提法AGPC法进行Total RNA的抽提。结果显示,使用本试剂盒抽提时的得率与使用苯酚的AGPC的得率大致相同,根据电泳模式及O.D.比值可知,能够抽提到几乎不含有蛋白质和DNA杂质的高纯度RNA



2.抽提RNART-PCR示例

从2×106 个人的HeLa细胞中抽提的Total RNA中取1μg,以Transferrin receptor mRNA为目的片段(2,115bp)进行RT-PCR结果显示,只有在进行了逆转录反应时才可以看到扩增,可以确认即使表达量较低的Transferrin receptor基因的表达也可以被检测到



3.从大鼠组织中进行抽提

使用本试剂盒从大鼠各组织中抽提Total RNA抽提时,将50〜100mg的组织用液氮冷冻后,用铁锤捣碎,再加入冰浴过的溶解・吸附液(含2−ME)750〜900μl,用Pestle充分匀浆,回收上清进行抽提。结果显示,使用本试剂盒即可从组织的匀浆上清中抽提高质量的RNA






 

参考文献

1)B. Vogelstein and D. Gillespie, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76:615-619(1979)
2)R. Boom et al., J. Clin. Microbiol., 28: 495-503(1990)

产品内容

溶解・吸附液
洗涤液Ⅰ*
洗涤液Ⅱ*
溶出液
磁珠

*洗涤液Ⅰ、Ⅱ在使用前请务必使其温度回至室温。 


注意事项

Code No.MFX-192 的产品是自动核酸抽提装置 MFX-9600系列专用的,不能用于手动抽提法中。


基本反应条件

本试剂盒按以下步骤进行抽提高纯度的Total RNA


1) 向样品中添加含有离液盐的溶解・吸附液,裂解样品中的细胞。


2) 添加磁硅珠,通过混合,使样品中的Total RNA被吸附在硅珠表面


3) 使用2类洗涤液洗涤硅珠,除去不要的蛋白质DNA和盐等


4) 使用灭菌水或低盐浓度的buffer等,从硅珠上溶解出Total RNA,进行回收

备注

MagExtractorTM 系列的各试剂盒中含有的磁硅珠,其组分各不相同,不能与其他试剂盒中的磁珠混用。 


几点建议

●B/F(固/液)分离 
使用本试剂盒手工操作时,若使用磁珠分离专用台架(Magical Trapper)会使操作更简便。也可用简易台式离心机来代替磁珠分离专用台架以进行B/F分离。

●从血液中抽提RNA 

抽提全血时,必须先进行白血球的Ficoll离心分离等的操作。 


●抽提时使用的样品量 过多的样品可能会降低回收率。建议使用适度的样品量。


●从组织中抽提 从组织中进行抽提的时候,不同组织会有不同的得率。从心脏、肌肉中抽提时,回收率会有所降低。


●DNaseⅠ处理 用本试剂盒抽提的Total RNA中含有微量的DNA。在进行RT-PCR前,如果先进行DNaseⅠ处理,会得到更稳定的结果。

FAQ请点击这里。

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