最适于DNA/RNA片段的脱磷酸化。容易热失活,使用方便。

牛来源的脱磷酸化酶 Calf Intestine Alkaline Phosphatase

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价格表

Code No. 包装 价格 保存温度 说明书
CAP-111 1,000U×1支 RMB400 -20℃ -

用途

●防止克隆载体的自身连接反应
●由Kinase利用[γ-32P]ATP对DNA/RNA进行5'末端标记的前处理

说明

本酶分子量为100,000,等电点(PI)=5.7,最适pH值为10.0~10.5,具有分解DNA及RNA的单磷酸酯键的活性。

不对双磷酸酯键或三磷酸酯键起作用,但对ATP等的焦磷酸结合显示出弱水解活性。抑制剂有Cu2+Ag+Hg2+及EDTA等。

连接反应中DNA片段的5’末端必须有磷酸根,利用这一点,使用本酶对内切酶处理后的载体进行脱磷酸化处理,可防止自连反应。

另外,制作5’末端标记探针时,预先除去探针的5’端磷酸根,可提高由Kinase利用[γ-32P]ATP添加标记磷酸根的效率。 


 

特征

●高耐热性

本酶显示出较高的耐热性,适用于平滑末端DNA片段等的高温长时间处理。

 

原理


实验例

实验例:BAP与CIAP热稳定性的不同

BAP与CIAP的热稳定性进行了比较。
BAP与CIAP相比,可知其热稳定性非常高。因此,用BAP处理DNA样品进行连接反应时,请务必用苯酚处理进行纯化。
另一方面,CIAP在65℃、30分钟进行热处理后,几乎能够完全失活。






 

参考文献

1)H. N. Ferunley, The Enzymes (3rd Ed.), 4: 417-447(1971)
2)R. K. Morton, Biochem. J., 61: 232-240(1955)
3)F. Dray et al., Methods of Enzymatic Analysis, 9: 348-362(1986)
4)P. Rathman and B. B. Saxtena, Methods of Enzymatic Analysis,9: 396-404(1986)

产品内容

Calf Intestine Alkaline Phosphatase(1-3U/μl)
10×Buffer〔CAP-1B〕

组分:
30mM Triethanolamin(pH7.6)
1mM MgCl2
50% Glycerol

10×Buffer组成:
500mM Tris-HCl (pH8.0)


活性的定义:
在37℃、pH10.2下,1分钟内加水分解1μmole对硝基苯磷酸盐(p-Nitorophenyl phosphate)时所需的酶量为1U。


来源:
Calf intestine


纯度:
5U的本酶和1μg的λDNA/HindⅢ分解物在37℃下反应16小时,DNA电泳模式未见变化。
2U的本酶和2μg的tRNA在37℃下反应16小时,tRNA电泳模式未见变化。

基本反应条件

<5'突出末端>
灭菌蒸馏水Xμl
DNA 5-20pmoles 5'端
10×Buffer 20μl
Alkaline Phosphatase 10U
Total Volume 200μl

37℃, 30min.


< 平滑末端、3'突出末端>
灭菌蒸馏水Xμl
DNA 5-20pmoles 5'端
10×Buffer 20μl
Alkaline Phosphatase 30U
Total Volume 200μl

37℃, 15min.
50℃, 15min.

几点建议

●反应后样品的纯化
本酶在65℃、30min.加热处理,几乎完全失活,为了接下去能进行成功的连接反应,建议进行苯酚处理或用试剂盒进行纯化。
可推荐本公司纯化试剂盒MagExtractorTM -PCR & Gel Clean up- 。

本酶耐热性高,加热处理不会失活。本酶带入连接反应中后,效率会大幅度降低,所以反应后的样品必需用苯酚处理,或用试剂盒进行纯化。纯化试剂盒推荐用MagExtractorTM -PCR & Gel Clean up- 等。

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