可用于DNA/RNA片段的脱磷酸化。防止发生自连反应。

大肠杆菌来源的脱磷酸化酶 E.coli Alkaline Phosphatase

  • NEW ITEM

价格表

Code No. 包装 价格 保存温度 说明书
BAP-111 100U×1支 RMB480 -20℃ -

用途

●防止克隆载体的自身连接反应

●由Kinase利用[γ-32 P]ATP对DNA/RNA进行5'末端标记的前处理


说明

本酶分子量为80,000~90,000,等电点(PI)=4.5,最适pH值为8.0,具有分解DNA及RNA的单磷酸酯键的活性。
不对双磷酸酯键或三磷酸酯键起作用,但对ATP等的焦磷酸结合显示出水解活性。抑制剂有螯合剂和无机磷酸。
连接反应中DNA片段的5'末端必须有磷酸根,利用这一点,使用本酶对内切酶处理后的载体进行脱磷酸化处理,可防止自连反应。

另外,制作5'末端标记探针时,预先除去探针的5’端磷酸根,可提高由Kinase利用[γ-32P]ATP添加标记磷酸根的效率。 



 

特征

●高耐热性

本酶显示出较高的耐热性,适用于平滑末端DNA片段等的高温长时间处理。

 

原理

参考文献

1)T. W. Reid and I. B. Willson, The Enzymes(3rd Ed.), 4: 373
2)A. Gaven and C. Levinthal, Biochem. Biophys. Acta., 38:470(1960)
3)K. Yoda et al., Agric. Biol.Chem., 44: 1213(1980)

产品内容

E.coli Alkaline Phosphatase

(0.1-1U/μl)

10×Buffer[BAP-1R]


组分:

50mM Tris-HCl (pH7.5)

50% Glycerol

10×Buffer [Code No. BAP-1R]


组成:

500mM Tris-HCl (pH8.0)

10mM MgCl2 



活性的定义:

25℃时1分钟内1M Tris-HCl(pH8.0)中水解1μmole的p-Nitorophenyl phosphate所需的酶量称为1U。



来源:

E.coli K12 SW1033/pk 1-5



纯度:

2U的本酶与1μg的λ DNA/Hind Ⅲ分解物在37℃反应16小时,DNA电泳模式未发生变化。

2U的本酶与2μg的tRNA在37℃下反应16小时,tRNA的电泳模式未发生变化。

基本反应条件

灭菌蒸馏水Xμl

DNA 0.5~2.5μg

10×Buffer 10μl

Alkaline Phosphatase 10μl

Total Volume 100μl

37℃、60min.(5'突出末端)

60℃、60min.(3'突出、平滑末端) 

几点建议

●反应后样品的纯化

本酶耐热性高,加热处理不会失活。本酶带入连接反应中后,效率会大幅度降低,所以反应后的样品必需用苯酚处理,或用试剂盒进行纯化。纯化试剂盒推荐用MagExtractorTM -PCR & Gel Clean up- 等。


●与Calf intestine Alkaline phosphatase 性质的比较

请参考Calf intestine Alkaline phosphatase 的实验例。 

相关产品

脱磷酸化反应后的样品制备

品名 Code No. 包装 价格 保存温度 说明书下载
MagExtractor -PCR & Gel Clean up- NPK-601 200次份 RMB 1,000 室温 -