消除Realtime PCR的定量范围、特异性、成本等烦恼。

高效率Realtime PCR Master Mix THUNDERBIRD® qPCR Mix 系列

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价格表

THUNDERBIRD® Probe qPCR Mix

Code No. 包装 价格 保存温度 说明书
QPS-101 1.67ml×3支 RMB 1,500 -20℃ 产品说明书
QPS-101T 1ml×1支 RMB 325 -20℃ 产品说明书

THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix

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QPS-201 1.67ml×3支 RMB 1,500 -20℃ 产品说明书
QPS-201T 1ml×1支 RMB 325 -20℃ 产品说明书

THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix Without Rox

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QPS-201(-) 1.67ml×3支 RMB 1,500 -20℃ -
QPS-201(-)T 1ml×1支 RMB 325 -20℃ -

用途

Realtime PCR

说明

THUNDERBIRD qPCR Mix是在Taq DNA polymerase基础上开发的高效率Realtime PCR用Master Mix(2×浓度), 是Realtime PCR Master Mix系列的改良产品。 最适合用于以cDNA、病毒DNA为样品的Realtime PCR分析。本系列产品有TaqMan® Assay(Probe Assay)用及SYBR®Green I用两类试剂盒可供选择。本产品通过采用新的增强剂等手段,对组分进行了根本性的改良,使得反应特异性和PCR效率有了飞跃式的提升,从而可得到更广的可定量扩增区域(dynamic range),而且可适用于模块型及毛细管型等各类仪器。 




 

特征

一地检测各种目的片段
采用了新的增强剂,对各种目的片段PCR效率的波动可控制在最小范围内

可以在较广的范围内进行检测

通过特异且高效率的扩增,可以在较广的测定范围内进行分析。

特异性(降低了引物二聚体)

通过对组分的最优化,使得PCR的特异性更高。通过降低非特异性反应,使得SYBR®  Green ITaqMan® Assay等对低拷贝目的片段的检测灵敏度更高。
 (请参考实验例)


使用了高纯度Taq DNA polymerase

PCR的基本性能得到了改善。


适用各类仪器

仪器protocol: Probe版 SYBR版


除适用于普通及高速的模块型(Block Type)仪器外,还适用于使用玻璃毛细管(Glass Capillary Type)的高速循环仪。由于另外添附了50× ROX reference dye,对于使用Passive Reference的仪器(Applied Biosystems公司制造的仪器、Stratagene公司制造的仪器),可根据各种仪器的特征把ROX调整到最适浓度。


●高速hot start

本产品采用了抗Taq聚合酶抗体的热启动系统。由于通过升温能使抗体迅速失活,因此预变性时间可以设定为很短。



 

实验例

SYBR® Green I检测体系的反应特异性比较

使用β-Actin cDNA的引物对,比较了各Realtime PCR试剂的反应特异性。

引物对是能扩增人的β-Actin cDNA的引物,模板是使用本公司高性能的逆转录试剂「ReverTra Ace® qPCR RT Kit [Code No. FSQ-101]」合成的HeLa细胞Total RNA来源的cDNA,将cDNA作10倍的梯度稀释(4个梯度),以no-template control(NTC)一起,分别作了复孔进行实验。(使用Roche Diagnostics LightCycler® 1.1)




 

参考文献

1) R.M. de Breuil et al., PCR Methods Appl., 3 : 57-59 (1993)
2) P.M. Holland et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88 : 7276-7280 (1991)

产品内容

【QPS-101T,QPS-201T,QPS-201(-)T】
qPCR Mix1ml ×1支
50X ROX reference dye50μl
(50μl反应体系40次,或20μl体系100次)


【QPS-101,QPS-201,QPS-201(-)】
qPCR Mix1.67ml ×3支
50X ROX reference dye250μl
(50μl反应体系200次,或20μl体系500次)


基本反应条件

〈SYBR® Green I 法〉
灭菌水Xμl
qPCR Mix10μl
Forward Primer6pmoles
Reverse Primer6pmoles
DNA样品Yμl
50×ROX referencre dye0.4/0.04μl*

Total Volume20μl


*50×ROX reference dye,是对于使用 Passive Reference 的仪器(如Applied Biosystems 公司制造的仪器等),为校正各孔间的荧光强度及分注误差而使用。不用 Passive Reference 进行校正的仪器无需添加。


Cycle
〈2步法〉
95℃     20~60sec.
         ↓
95℃     1~15sec
60℃     30~60sec.
40 cycles

〈3步法〉
95℃     20~60sec.
        ↓
95℃     1~15sec
55~65℃  5~30sec.
72℃     30~60sec.

40 cycles


※退火温度,请在引物的Tm~Tm-5℃的范围内设定。
※目的片段在 300bp 以下时,延伸时间 30 秒即可进行充分的反应。但一部分仪器为了能够测定到稳定的荧光,延伸时间需大于 30 秒。扩增曲线散乱,或各孔间的差异较大时,请设定较长的延伸时间(45-60 秒)。

备注

LightCycler® 是Idaho Technology Inc.的商标。
SYBR® 是Molecular Probes Inc.注册的商标。
TaqMan® 是Roche Molecular Systems Inc.注册的商标。
ABI PRISM® 是Applied Biosystems Inc.注册的商标。

几点建议


●保存

经确认该产品反复冻融 10 次对品质没有影响。


逆转录反应液的加入量
将普通逆转录反应试剂合成的cDNA,无需纯化,用灭菌水等稀释后可直接添加到Realtime PCR反应液中。添加量不应超过总反应体系的10%。过量的添加会大大改变PCR反应缓冲液的组成,导致定量性降低。另外如果使用的某种市售的cDNA合成试剂盒不是专门针对荧光定量PCR 而设计的,那么添加的 cDNA 体积应小于总反应体系的10%。
使用本公司的ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix系列及ReverTra Ace® qPCR RT Kit时,可添加最多至20%的液量。

相关产品

●Realtime PCR用cDNA合成试剂盒

品名 Code No. 包装 价格 保存温度 说明书下载
ReverTra Ace® qPCR RT Kit FSQ-101 200次份 × 1
(10μl反应体系)
RMB 1,500 -20℃ 产品说明书
ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix FSQ-201 200次份 × 1
(10μl反应体系)
RMB 2,000 -20℃ 产品说明书
ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover FSQ-301 200次份 × 1
(10μl反应体系)
RMB 2,800 -20℃ 产品说明书