Illumina平台二代测序用文库构建试剂盒 GenNext® NGS Library Prep Kit

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价格表

Code No. 包装 价格 保存温度 说明书
LPK-101T 8次 2100 -20℃ 产品说明书
LPK-101 24次 4100 -20℃ 产品说明书
LPK-101L 96次 12600 -20℃ 产品说明书

用途

Illumina公司NGS测序用文库的制备

说明

GenNext® NGS Library Prep Kit可从片段化的双链DNA或PCR产物开始,制备illumina® 公司NGS测序用文库。使用本产品,可简便且迅速地制备文库。

使用本品,对1 ng - 1μg 的双链DNA片段的末端进行修复及3’末端的加A反应后,与末端带TAdapter进行连接。


InputDNA量少,需要扩增文库时,可使用基因改良型KOD DNA polymerase开发的高保真性PCR酶,低偏差地扩增末端带有Adapter序列的文库。



 

特征

简便且快速的操作流程

从末端修复及3’末端加AAdapter连接操作都在同一个反应容器中进行。末端修复及3’末端加A进行15分钟,Adapter的连接需要15分钟即完成。文库扩增时使用退火10秒、延伸15秒的循环即可进行反应。


范围较广的input

对应较广范围的input量(1 ng - 1μg)进行的设计。

低偏差的文库扩增

文库扩增时使用的Library Amplification Master Mix是使用基因改良型KOD DNA polymerase进行开发的高保真PCR酶。因GC不均导致的影响降到了最低、可均一地扩增各种片段。

 

实验例

1. NGS评价文库制备试剂盒

使用MiSeq(illumina公司)及MiSeq Reagent Kit v2(300 Cycles) (illumina公司)进行大肠杆菌基因组(1ug PCR Free或1ng 用12循环进行扩增)的NGS分析。文库的制备使用Library Preparation Kit (Code: LPK-101T)或  A公司文库制备试剂盒进行。文库数据为了与read数相等,进行down sampling, 各样品收集100万read数,进行分析。分析是使用CLC Genomics Workbench (QIAGEN公司/CLC bio)进行的。

结果显示,使用GenNext® NGS Library Prep Kit比使用其他公司的试剂,得到了更好的mapping效率与更低的错误率。


2. 文库得率及分布的比较

以片段化处理过的人基因组DNA 1、10、100ng、大肠杆菌基因组DNA 1ug、以及100bp DNA Ladder 1、10ng开始,使用GenNext® NGS Library Prep KitA公司文库制备试剂盒进行文库的制备。

Adapter是使用illumine 公司的Index Adapter, 文库的cleanup是使用Agencourt  AMPure  XP的试剂(Beckman Coulter)。

1ug没有扩增、1ng用11个循环、10ng用8个循环、100ng用5个循环进行扩增,文库size的分布用MultiNA® (岛津生产公司)的产品进行确认。文库的得率用GenNext® NGS Library Quantification Kit (Code: NLQ-101)进行确认。

<结果>

进行文库size的分布时,用本公司GenNext® NGS Library Prep Kit和A公司试剂时,结果相同;低input量时,使用GenNext® NGS Library Prep Kit,与使用A公司的试剂相比,可得到较高的得率。因为不管哪一种都是要提供给MiSeq,所以都得到了必需的4nM以上的得率。




 

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