KOD FX
实验例21~22



 实验例 5Human转录因子(HNF3b, C/EBPβ, FTFHNF6)cDNAmiR-17,18,19,20,92区域genomic DNA的扩增






【基因名、目的片段长、及引物序列】
  ●HNF3b (目的片段长:1.4kb)
      引物  5'ACTCGAATTCCAGTATGCTGGGAGCGGTGAAGA3’
          5'AAGGGGTACCAGAGTTAGCCGGGCCTGAA3'
  ●C/EBPβ (目的片段长:1.0kb)
            引物  5'ATTAGAATTCGTTCATGCAACGCCTGGTGGCC3'
      5'CGCGGGTACCGCGCTAGCAGTGGCCGGAGGA3'
  ●FTF        (目的片段长:1.6kb)
            引物  5'CTATGAATTCACTAAGAATGTCTTCTAATTC3'
      5'ATTCGATATCTTTAAAGCAAGTTTTTAA3'
  ●HNF6     (目的片段长:1.4kb)
            引物  5'TCGCGAATTCCACGATGAACGCGCAGCTGACCAT3'
      5'CTTTGGTACCGAGGTTTTAGTTTGTGGTTCT3'     
     ● miR-17,18,19,20,92領域   (目的片段长:1.1kb)
            引物  5'GGTTACTAGTTGTTAGAGTTTGAGGTGTTA3'
        5'TATGACTAGTCATATCGCAATACTTAACAG3
                       (红字表示homologous sequence)

【样品】
  HNF3b, C/EBPβ,FTF,HNF6:
   人肝癌由来细胞株HuH7由来cDNA(0.1μg Total RNA相当)
  miR-17~92:
   人肝癌由来细胞株HuH7由来Genomic DNA 0.2μg



【循环】
  KOD FX
  94℃ 2min-
  (98℃ 10sec, 55℃ 30sec, 68℃ 2min) ×40cycles
  其他公司酶:推荐条件



【数据提供】
 金泽大学癌症研究所细胞信息调节
 黑木 和之 老师



【来自老师的评语】
 很容易得到各种克隆,很惊讶。




实验例6: 连接植物表达启动子的植物病毒cDNA扩增


【基因名】发现Promoter+植物病毒cDNA
【样品】质粒DNA 0.2μg
【目的片段长】11kb
【引物】21 mer(GC=21%)
【循环】
KOD FX: 
94℃, 2.5min.,
(94℃, 15sec., 57℃, 15sec., 68℃, 7min.) x 25
A公司Long PCR酶、高保真性酶:
94℃, 2.5min.,
(94℃, 15sec., 57℃, 15sec., 72℃, 7min.) x 25 




【数据提供】
日本大学生物资源科学部 植物病理学研究室 井村 喜之 老师





【来自老师的评语】
相比A公司的Long PCR酶,KOD FX的扩增效率要出色许多。而用A公司的高保真性酶,则无论用什么样的条件都无法得到扩增。
而且,50μl的反应体系用1UKOD FX就足够得到良好的结果。